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Schnupperkurs Gentechnik
4 Tage Gentechnik im S1 Labor:
"vom Gen zum Protein"
2.1.-5.1.2006, ExploHeidelberg Lernlabor |
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Lernlabor | ||||||||||
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Experiment:
Ziel des Kurses ist die Klonierung einer interessanten Region aus dem Bakteriophagen Lambda in den Plasmidvektor pUC18, die anschließende Expression eines Proteins in E.coli und Aufreinigung mittels Affinitätschromatographie und Analyse durch Protein Gel Elektrophorese.
| Tag 1: | Sicherheitsbelehrung |
| Medienlabor: Restriktionsverdau der Vektoren am Computer | |
| Restriktionsverdau von Phage Lambda DNA | |
| Plasmidprep pUC18 Vektor | |
| PCR eines Fragmentes der Lambda DNA, Agarosegelelektrophorese | |
| Tag 2 | Restriktionsverdau pUC18 & PCR Produkt, Agarosegelelektrophorese |
| Ansetzen von Kulturmedium für Bakterien, Autoklavieren | |
| Reinigen des PCR Produktes | |
| Ligation von PCR Produkt und Vektor | |
| Transformation von E.coli Bakterien mit Ligationsansatz | |
| Besichtigung der Explo Ausstellung | |
| Transformation von E.coli mit Vektor zur Proteinexpression | |
| Tag 3 | Checken der Klone mittels der PCR, Agarosegelelektrophorese |
| Animpfen von Flüssigmedium mit Zellen zur Proteinexpression | |
| Besichtigung des Zoologie Museums | |
| Induktion der Proteinexpression | |
| Tag 4 | Aufreinigung des Proteins aus der Zellkultur |
| Proteinanreicherung mittels einer Fällungsreaktion | |
| Bestimmung des Proteingehaltes | |
| Protein Polyacrylamide Gel Elektrophorese | |
| Abschlußbesprechung |