Experimente: PCR, Plasmidisolierung, Agarose-Gelelektrophorese
Klassenstufe: 11-13
Dauer: ca. 6 Std.
Materialkosten pro Person: 7 Euro
erforderliche Theoriekenntnisse: Aufbau der DNA, Basenpaarung, Doppelhelix, Anwendung der PCR, Taq Polymerase, Plasmide, Antibiotika-Resistenz, Restriktionsenzyme.

Polymerase-Kettenreaktion (PCR)
Die Polymerase-Kettenreaktion (kurz: PCR für engl. Polymerase Chain Reaction) ist eine Methode, um DNA zu vervielfältigen, ohne einen lebenden Organismus wie z.B. E.coli zu benutzen. Die PCR wird in biologischen und medizinischen Laboratorien für eine Vielzahl verschiedener Aufgaben verwendet, z.B. für die Erkennung von Erbkrankheiten, für das Erstellen genetischer Fingerabdrücke, für Vaterschaftstests, für das Klonieren von Genen und vieles mehr. Im Praktikumsversuch werden von den Teilnehmern DNA-Proben mit einer PCR vervielfältigt und die Produkte dann mit der Technik der Agarose-Gelelektrophorese analysiert.
Plasmidisolierung
Plasmide sind kleine, ringförmige DNA-Moleküle, die in Bakterien neben der DNA des "Bakterienchromosoms" vorliegen können. Sie tragen Informationen, die den Bakterien einen Selektionsvorteil gegenüber Plasmid-freien Bakterien bringen. Häufig sind Plasmide Träger von Antibiotika-Resistenzen. In der Gentechnik werden Plasmide als Vektoren verwendet, um Fremd-Gene in Bakterien einzuschleusen. Im Praktikum soll die Isolierung eines Plasmids aus einer Bakterienkultur durchgeführt werden. Der Nachweis der isolierten Plasmid-DNA erfolgt durch die Agarose-Gelelektrophorese.
Agarose-Gelelektrophorese
Die Analyse von DNA-Molekülen mit der Agarose-Gelelektrophorese ist die übliche Technik, um die Größe der Moleküle zu bestimmen bzw. verschiedene große Moleküle zu unterscheiden. In diesem Kurs werden die PCR-Produkte und die isolierten Plasmide gelelektrophoretisch analysiert.