Untersuchung der ß-Galactosidase
Experimente: PCR, Plasmidisolierung,
ELISA, Agarose-Gelelektorphorese
Klassenstufe: 11-13
Dauer: ca. 7 Std.
Materialkosten pro Person: 10 Euro
erforderliche Theoriekenntnisse: Aufbau der DNA, Basenpaarung,
DNA-Dopplhelix, Anwendung der PCR, Taq-Polymerase, Aufbau Plasmide,
Antibiotikaresistenz, Immunsystem.
In diesem
Praktikum werden verschiedene Techniken angewendet, um
die ß-Galactosidase in Bakterien nachzuweisen. Dazu werden
in einem ersten Schritt Bakterienzellen lysiert. Das
Lysat wird dann verwendet, um ein Plasmid zu isolieren,
das das ß-Galactosidase-Gen trägt. Anschließend
wird das selbst isolierte Plasmid als Vorlage in einer
Polymerase-Kettenreaktion eingesetzt, um das ß-Galactosidase-Gen
zu vervielfältigen. Die Überprüfung der
Ergebnisse geschieht mit der Agarose-Gelelektrophorese.
Zuletzt wird in einem ELISA mit Hilfe eines spezifischen
Antikörpers die ß-Galactosidase selbst nachgewiesen.