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Lernlabor - Schnupperkurs Gentechnik

4 Tage Gentechnik im S1 Labor: "vom Gen zum Protein"; 04.-07.09.2007

(weitere Termine: Herbstferien (29.-31.10 & 2.11.2007), Weihnachstferien (02.-05.01.2008)

 
Kurs ist auf maximal 12 Teilnehmer begrenzt !
 
Kursgebühr 80 €
 
Anmeldung per email ! "first come, first serve"
Kontakt:
 
Dr. Thomas Wendt
ExploHeidelberg Teaching Lab
Tel.: (+49)6221 421404
Fax: (+49)6221 421410
email: [email protected]

Experiment:

Der Kurs vermittelt einen Überblick über gängige molekularbiologische Techniken. Ziel des Kurses ist die Klonierung einer interessanten Region aus dem Bakteriophagen Lambda in den Plasmidvektor pUC18. Die Eigenschaften von DNA und Proteinen, ihre Isolierung, Vervielfältigung und Manipulation werden sowohl theoretisch als auch praktisch untersucht.

Beginnend mit genomischer DNA wird ein interessanter Genabschnitt über die Polymerasekettenreaktion (PCR) vervielfältigt, mit Restriktionsenzymen zurechtgeschnitten und in einen Vektor eingebaut (ligiert). Der Teilnehmer erlernt dabei zusätzlich die folgenden Methoden: Gel-Elektrophorese, Transformation, Blau-Weiß-Selektion. Nach erfolgreicher Selektion und Überprüfung der Klone wechseln wir zur Proteinbiochemie und untersuchen die Proteinexpression des Reportergens GFP (green fluorescent protein). Dies wird aus E.coli Kulturen mittels Affinitätschromatographie isoliert. Analyse der Reinheit und Ausbeute erfolgt durch SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese und Bradford Assay. Um auch die Immunbiologie abzudecken wird mittels eines ELISA ein Antikörper-Titer bestimmt.

Tag 1  Sicherheitsbelehrung
  Medienlabor: Restriktionsverdau der Vektoren am Computer
  Restriktionsverdau von Phage Lambda DNA
  Plasmidprep pUC18 Vektor
  PCR eines Fragmentes der Lambda DNA, Agarosegelelektrophorese
   
Tag 2 Restriktionsverdau pUC18 & PCR Produkt, Agarosegelelektrophorese
  Ansetzen von Kulturmedium für Bakterien, Autoklavieren
  Reinigen des PCR Produktes
  Ligation von PCR Produkt und Vektor
  Transformation von E.coli Bakterien mit Ligationsansatz
  Besichtigung der Explo Ausstellung
  Transformation von E.coli mit Vektor zur Proteinexpression
   
Tag 3 Aufreinigung des Proteins aus Zellkultur
  Proteinanreicherung mittels einer Fällungsreaktion
  Bestimmung des Proteingehaltes
  Protein Polyacrylamide Gel Elektrophorese 
   
Tag 4 Checken der Klone mittels der PCR, Agarosegelelektrophorese
  ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)
  Abschlußbesprechung