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Lernlabor -
Schnupperkurs Gentechnik
4 Tage Gentechnik
im S1 Labor: "vom Gen zum Protein"; 04.-07.09.2007
(weitere Termine:
Herbstferien (29.-31.10 & 2.11.2007), Weihnachstferien (02.-05.01.2008)
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Kurs
ist auf maximal 12 Teilnehmer begrenzt !
Kursgebühr
80 €
Anmeldung per
email ! "first come, first serve"
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Kontakt:
Dr. Thomas Wendt
ExploHeidelberg Teaching Lab
Tel.: (+49)6221 421404
Fax: (+49)6221 421410
email: [email protected]
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Experiment:
Der Kurs vermittelt
einen Überblick über gängige molekularbiologische
Techniken. Ziel des Kurses ist die Klonierung einer interessanten
Region aus dem Bakteriophagen Lambda in den Plasmidvektor
pUC18. Die Eigenschaften von DNA und Proteinen, ihre Isolierung,
Vervielfältigung und Manipulation werden sowohl theoretisch
als auch praktisch untersucht.
Beginnend mit genomischer DNA wird
ein interessanter Genabschnitt über die Polymerasekettenreaktion
(PCR) vervielfältigt, mit Restriktionsenzymen zurechtgeschnitten
und in einen Vektor eingebaut (ligiert). Der Teilnehmer erlernt
dabei zusätzlich die folgenden Methoden: Gel-Elektrophorese,
Transformation, Blau-Weiß-Selektion. Nach erfolgreicher
Selektion und Überprüfung der Klone wechseln wir zur
Proteinbiochemie und untersuchen die Proteinexpression des Reportergens
GFP (green fluorescent protein). Dies wird aus E.coli Kulturen
mittels Affinitätschromatographie isoliert. Analyse der
Reinheit und Ausbeute erfolgt durch SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese
und Bradford Assay. Um auch die Immunbiologie abzudecken wird
mittels eines ELISA ein Antikörper-Titer bestimmt.

| Tag 1 |
Sicherheitsbelehrung |
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Medienlabor: Restriktionsverdau
der Vektoren am Computer |
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Restriktionsverdau von Phage
Lambda DNA |
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Plasmidprep pUC18 Vektor |
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PCR eines Fragmentes der
Lambda DNA, Agarosegelelektrophorese |
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| Tag 2 |
Restriktionsverdau pUC18 & PCR
Produkt, Agarosegelelektrophorese |
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Ansetzen von Kulturmedium
für Bakterien, Autoklavieren |
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Reinigen des PCR Produktes |
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Ligation von PCR Produkt
und Vektor |
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Transformation von E.coli
Bakterien mit Ligationsansatz |
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Besichtigung der Explo Ausstellung |
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Transformation von E.coli
mit Vektor zur Proteinexpression |
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| Tag 3 |
Aufreinigung
des Proteins aus Zellkultur |
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Proteinanreicherung
mittels einer Fällungsreaktion |
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Bestimmung
des Proteingehaltes |
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Protein Polyacrylamide
Gel Elektrophorese |
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| Tag 4 |
Checken
der Klone mittels der PCR, Agarosegelelektrophorese |
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ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) |
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Abschlußbesprechung |
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